Extração de RNA - RNA extraction
A extração de RNA é a purificação do RNA de amostras biológicas. Este procedimento é complicado pela presença onipresente de enzimas ribonuclease em células e tecidos, que podem degradar rapidamente o RNA. Vários métodos são usados em biologia molecular para isolar o RNA de amostras, o mais comum deles é a extração de tiocianato-fenol-clorofórmio de guanidínio . O método de lise e eluição com base em papel de filtro apresenta alta capacidade de processamento.
A extração de RNA em nitrogênio líquido, comumente usando um almofariz e pilão (ou dispositivos de aço especializados conhecidos como pulverizadores de tecido) também é útil na prevenção da atividade da ribonuclease.
Contaminação RNase
A extração de RNA em experimentos de biologia molecular é muito complicada pela presença de RNases ubíquas e resistentes que degradam as amostras de RNA. Certos RNases podem ser extremamente resistentes e inativá- los é difícil em comparação com DNases neutralizantes . Além das RNases celulares que são liberadas, existem várias RNases que estão presentes no meio ambiente. RNases evoluíram para ter muitas funções extracelulares em vários organismos. Por exemplo, RNase 7, um membro da superfamília RNase A , é secretada pela pele humana e serve como uma defesa antipatogênica potente. Para essas RNases secretadas, a atividade enzimática pode nem mesmo ser necessária para a função expandida da RNase . Por exemplo, as RNases imunes atuam desestabilizando as membranas celulares das bactérias.
Para combater isso, o equipamento usado para extração de RNA é geralmente limpo completamente, mantido separado do equipamento de laboratório comum e tratado com vários produtos químicos que destroem RNases. Pelo mesmo motivo, os experimentadores tomam cuidado especial para não deixar que sua pele nua toque o equipamento.
Veja também
Referências
links externos
Lavagem de duas fases para resolver o problema onipresente de transmissão de contaminantes em kits comerciais de extração de ácido nucléico ; por Erik Jue, Daan Witters e Rustem F. Ismagilov; Nature, Scientific reports, 2020.