Touchdown reacção em cadeia da polimerase - Touchdown polymerase chain reaction
A reacção em cadeia da polimerase aterragem ou reacção em cadeia da polimerase estilo aterragem é um método de reacção da polimerase em cadeia , através da qual os iniciadores evitar a amplificação de sequências não específicas. O recozimento temperatura durante uma reacção em cadeia da polimerase determina a especificidade de emparelhamento do iniciador. O ponto de fusão do iniciador define o limite superior da temperatura de recozimento. A temperaturas um pouco acima deste ponto, apenas a emparelhamento de bases muito específica entre o iniciador e o molde irá ocorrer. A temperaturas mais baixas, os iniciadores ligar-se especificamente menos. A ligação não específica do iniciador obscurece resultados da reacção em cadeia da polimerase, como as sequências não específicas a que os iniciadores emparelham na passos iniciais de amplificação irá "pântano para fora" quaisquer sequências específicas devido à exponencial natureza da polimerase amplificação.
Método
As primeiras etapas de um ciclo de reacção em cadeia da polimerase aterragem têm temperaturas elevadas de recozimento. A temperatura de recozimento é diminuída em incrementos para cada conjunto subsequente de ciclos (número de ciclos individuais e incrementos de diminuição de temperatura é escolhida pelo experimentador). O iniciador vai emparelhar à temperatura mais elevada, que é menos permissiva de ligação não específica que é capaz de tolerar. Assim, a primeira sequência amplificada é a que existe entre as regiões de maior especificidade do iniciador; o mais provável é que esta é a seqüência de interesse. Estes fragmentos serão ainda mais amplificado durante ciclos subsequentes a temperaturas mais baixas, e irão competitivamente as sequências não específicas às quais os iniciadores se podem ligar a essas temperaturas mais baixas. Se o iniciador inicialmente (durante as fases de temperaturas mais elevadas) liga-se à sequência de interesse, ciclos subsequentes de reacção em cadeia da polimerase pode ser executada sobre o produto para amplificar ainda mais esses fragmentos. Touchdown aumenta a especificidade da reacção a temperaturas mais elevadas e aumentar a eficiência no final, baixando a temperatura de recozimento.