PLEKHA7 - PLEKHA7
PLEKHA7 (membro 7 da família A contendo domínio de homologia de Pleckstrin ) é uma proteína de junção aderente (AJ), envolvida na integridade e estabilidade da junção.
História
A proteína foi descoberta no laboratório de Masatoshi Takeichi enquanto procurava potenciais parceiros de ligação para a região N-terminal de p120 . PLEKHA7 foi identificado por espectrometria de massa em lisados de células de carcinoma intestinal humano ( Caco-2 ) em um GST-pull down usando GST N-terminal - fusão catenina p120 como isca. Também foi descoberto de forma independente no grupo de Sandra Citi como uma proteína interagindo com o domínio da cabeça globular da Paracingulina em uma triagem de dois híbridos de levedura . PLEKHA7 localiza-se em AJs zonulares epiteliais.
Estrutura
A estrutura de PLEKHA7 é caracterizada por dois domínios WW seguidos por um domínio de homologia de Pleckstrina (PH) na região N-terminal. Na metade C-terminal, a proteína contém três domínios de bobina enrolada (CC) e dois domínios ricos em Proline (Pro). PLEKHA7 foi detectado em diferentes isoformas de uma maneira específica de tecido. Duas isoformas de 135 kDa e 145 kDa foram relatadas no cólon, fígado, pulmão, olho, pâncreas, rim e coração. Além disso, dois transcritos principais de 5,5 kb e 6,5 kb foram identificados no cérebro, rim, fígado, intestino delgado, placenta e pulmão, enquanto apenas um transcrito de mRNA de PLEKHA7 de 5,5 kb foi identificado no coração, cérebro, cólon e músculo esquelético.
Interações proteína-proteína
Estudos de interação in vitro foram realizados para mapear a (s) interação (ões) de PLEKHA7 com p120 (resíduos 538-696), Nezha ( CAMSAP3 ) (resíduos 680-821), paracingulina (resíduos 620-769) e Afadina (resíduos 120-374) . A proteína PDZD11 foi identificada como uma proteína interagindo por meio de sua região N-terminal com o domínio N-terminal WW de PLEKHA7, com base na triagem de 2 híbridos e análise de imunoprecipitados PLEKHA7. Ao contrário da maioria das outras proteínas AJ, mas semelhante à afadina, PLEKHA7 é exclusivamente detectado na parte apical zonular de AJ, mas não no “ponto aderente” ao longo das membranas laterais das células epiteliais. A localização celular e a distribuição de tecido de PLEKHA7 foram confirmadas por microscopia imunoeletrônica (Immuno-EM) de tipo selvagem e tecidos epiteliais intestinais destruídos.
Função
A primeira função identificada de PLEKHA7 foi contribuir para a integridade e estabilidade das junções de zônula aderente , ligando o complexo E-caderina / p120 às extremidades negativas dos microtúbulos (MTs) através de Nezha (CAMSAP3). O complexo PLEKHA7-Nezha-MTs permite o transporte do KIFC3 (um motor direcionado para o lado negativo) para o AJ. No entanto, na linha celular Eph4, PLEKHA7 é recrutado para AJ baseado em caderina-E por Afadin, independentemente de p120. Os estudos de knockdown de PLEKHA7 em células de rim canino Madin-Darby ( MDCK ) indicaram sua necessidade para a localização de paracingulina em AJ. Além disso, o homólogo PLEKHA7 no peixe-zebra , Hadp1, é necessário para o funcionamento adequado do coração e morfogênese no embrião, regulando o Ca intracelular2+
dinâmica através da via da fosfatidilinositol 4-quinase (PIK4).
Em 2015, os investigadores descobriram que PLEKHA7 recruta o chamado microprocessador complexo (associação de Drosha e DGCR8 proteínas) para um local de inibição de crescimento (apicais zonula adherens ) em células epiteliais , em vez de locais em áreas basolaterais de contacto célula-célula contendo tirosina - p120 fosforilado e Src ativo . A perda de PLEKHA7 interrompe a regulação de miRNAs , causando sinalização tumorigênica e crescimento. Restaurar os níveis normais de miRNA em células tumorais pode reverter essa sinalização aberrante. Em 2015, também foi descoberto que PLEKHA7 tem um papel no controle da suscetibilidade à alfa-toxina do Staphylococcus aureus. As células sem PLEKHA7 são feridas pela toxina, mas se recuperam após a intoxicação. Os camundongos knockout para PLEKHA7 são viáveis e férteis e, quando infectados com a cepa LAC de S. aureus USA300 LAC resistente à meticilina, mostram uma diminuição da gravidade da doença tanto na infecção de pele quanto na pneumonia letal, identificando assim PLEKHA7 como um potencial alvo não essencial do hospedeiro para reduzir S. aureus virulência durante infecções epiteliais.
Em 2016, os pesquisadores descobriram que PLEKHA7 recruta a pequena proteína PDZ PDZD11 para as junções aderentes, resultando assim na estabilização das nectinas nas junções aderentes. O nocaute de PLEKHA7 resulta na perda de PDZD11 das junções epiteliais aderentes, e isso é resgatado pela introdução de PLEKHA7 exógeno. Os 44 resíduos do terminal N de PDZD11 interagem com o primeiro domínio WW de PLEKHA7. Na ausência de PLEKHA7 ou PDZD11, a quantidade de nectina-3 e nectina-4 detectada nas junções é diminuída, bem como os níveis de nectina total, por meio da degradação mediada por proteassoma. O PDZD11 interage diretamente com o motivo de ligação ao PDZ citoplasmático das nectinas, por meio de seu próprio domínio PDZ. O ensaio de ligação de proximidade mostra que PLEKHA7 está associado a nectinas de uma maneira dependente de PDZD11. As nectinas são a segunda maior classe de moléculas de adesão transmembrana nas junções aderentes, além das caderinas. Portanto, PLEKHA7 estabiliza caderinas e nectinas em AJ.
Significado clínico
Estudos de associação de todo o genoma sugerem que PLEKHA7 está associado com pressão arterial, hipertensão e glaucoma primário de ângulo fechado . Além disso, foi relatado um aumento da expressão de PLEKHA7 no câncer de mama lobular invasivo . Em um estudo mais recente, a expressão da proteína PLEKHA7 em carcinomas ductais de mama de alto grau e carcinomas de mama lobulares foi considerada muito baixa ou indetectável por imunofluorescência ou imunohistoquímica, apesar da detecção de mRNA de PLEKHA7 Um estudo da Mayo Clinic publicado online em agosto de 2015 descobriram que PLEKHA7 está mal localizado ou perdido em quase todas as amostras de pacientes com tumor de mama e rim examinadas.